实验前期准备，提前配制实验所需缓冲液，调节pH与渗透压，使用95%氧气和5%二氧化碳混合气持续通气平衡。检查整套设备，包含恒温水浴、电压电流钳放大器、数据采集系统、Ag/AgCl电极、琼脂盐桥、半池腔体、密封圈与通气管路，确认盐桥无气泡、电极无发黑污染，密封圈完好无破损。设置水浴温度，稳定控制在37摄氏度，提前预热腔体。组织样品在冰浴通气缓冲液中进行解剖处理，肠组织沿肠系膜剪开，剥离浆膜肌层，裁剪至适配腔体开孔大小，全程夹持组织边缘，避免触碰上皮面造成损伤，单层细胞膜样品用缓冲液轻柔漂洗备用。
电极与腔体零点校准，在未放置组织的状态下，向两侧半池加入相同缓冲液，插入电压电极与电流电极，排尽盐桥端部气泡，开启采集软件，进行液接电势归零与溶液电阻补偿，消除缓冲液本身带来的电位偏差，校准完成后将放大器切换至待机模式。
组织装夹，将组织平整放置在上下半池之间，注意区分极性，黏膜侧对应顶侧腔，浆膜侧对应基底侧腔，组织不能褶皱、拉伸，边缘完整压在密封圈上，防止侧漏。缓慢闭合腔体并均匀锁紧，不要用力挤压撕裂组织，向两侧腔体加入预通气、预热好的缓冲液，开启通气，气泡轻柔搅动溶液，避免气泡直接冲击组织表面，记录腔体有效通透面积。
组织平衡稳定阶段，通气保温条件下静置平衡，一般平衡时长10至20分钟，持续记录跨上皮电位PD、短路电流Isc以及跨上皮电阻TEER，等待基线平稳，漂移控制在允许范围，电阻数值稳定后方可开展后续给药或渗透实验。基线波动大、电阻持续下降，大概率是组织破损或者密封渗漏，需要重新装样。
正式测试采集，若是离子转运实验，开启电压钳模式，设置钳位电压为0mV，持续记录短路电流，定时施加小幅电压脉冲计算上皮电阻，按照实验方案在顶侧或者基底侧加入药物、激动剂、抑制剂，标记给药时间点，同步记录各项电参数变化。若是药物渗透通量实验，一侧更换为含待测物的供体缓冲液，另一侧为空白受体缓冲液，保持受体侧为Sink条件，按预设时间点从受体侧取样，同时补入同等体积新鲜缓冲液，后续检测样品浓度，计算表观渗透系数Papp。
样品冲洗与洗脱，给药结束后，用预热通气缓冲液多次更换两侧溶液，洗去残留受试物，继续观察电信号能否回落到基线，用于洗脱可逆效应。
实验结束收尾，停止采集，保存原始数据与曲线记录，关闭放大器、水浴和气路。取出组织，用去离子水冲洗腔体、盐桥和电极，盐桥可浸泡保存，电极避光保湿存放，腔体擦干，清理密封圈残留污物，所有部件晾干备用。实验后可对组织进行固定染色，辅助验证组织完整性。
操作注意事项，气泡是基线漂移的主要诱因，装样和加液过程中要及时排泡；上皮组织极性不可颠倒，会直接改变转运结果；通气气泡不宜过大，防止组织被气流持续冲击受损；缓冲液现配现用，长时间放置会造成pH、渗透压偏移；每次更换盐桥、缓冲液之后，都需要重新进行零点校准。
更新时间：2026-10-26
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